康寧基底膜基質(zhì)可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞，厚層凝膠法允許您在三位基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復(fù)雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養(yǎng)細胞。您的選擇基于您想要實現(xiàn)的最終結(jié)果，無論是細胞生長、附著還是分化。

薄層凝膠法

  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 μl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì)。

  3. 將培養(yǎng)板放置在 37 °C ，30 分鐘。

  4. 如果有必要的話，請在使用無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

厚層凝膠法

  1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200 μl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì)。

  3. 將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘。現(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。

薄層包被法

  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。

  2. 使用無血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的應(yīng)用程序，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。

  3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個小時。

  4. 吸出未結(jié)合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

細胞復(fù)蘇：

  康寧中性蛋白酶(貨號 354235)，康寧細胞復(fù)蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時內(nèi)解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長在康寧基底膜基質(zhì)上的細胞最有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

  因為康寧基底膜基質(zhì)在 10°C 以上會開始凝膠化，所以極其重要的是康寧基底膜基質(zhì)和所有的進入與康寧基底膜基質(zhì)接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。產(chǎn)品需要放置于冰上，并在 2oC-6oC 的冰箱中或者冷室中過夜融化，蛋白濃度高時可能需要更多時間。操作康寧 Matrigel matrix時，我們建議使用預(yù)冷的移液管、吸頭和管子。在實驗的全部過程中請保持康寧基底膜基質(zhì)處于冰上。

  康寧高濃度 Matrigel matrix 用于哪些實驗？

康寧高濃度的 Matrigel matrix matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使康寧 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

如何將康寧 Matrigel matrix 用于 3D 培養(yǎng)？

怎樣制作 3D 膠？

需要將細胞嵌入到康寧 Matrigel matrix 中嗎？

康寧高濃度的 Matrigel matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如制備厚層包被用于 3D 細胞培養(yǎng)。細胞可以嵌在康寧 Matrigel matrix 中或者接種在康寧 Matrigel matrix 表面（覆蓋法）。

使用 Corning Matrigel matrix 時，需要將移液器吸頭和離心管預(yù)冷嗎？

是的。因為 Corning Matrigel matrix 在高于 10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作 Matrigel matrix 時使用預(yù)冷的移液管、吸頭和離心管。

Corning Matrigel matrix 會快速聚合嗎？

Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃時會快速聚合成膠。

什么情況下，需要使用無酚紅 Corning Matrigel matrix？

對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅 Corning Matrigel matrix，如使用熒光染料或 Drabkins 法計數(shù)內(nèi)皮細胞成管實驗。對于子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng)，也需使用無酚紅 Corning Matrigel matrix。

此外，酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似，有類雌激素效應(yīng)。在實驗動物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。

如何從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞？

推薦使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 來收獲培養(yǎng)在Matrigel matrix 中的細胞。

Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進行檢測的細胞，使用 Corning Dispase 不會產(chǎn)生損傷。此外，Corning Dispase 也可以用于組織分離。

對于代謝研究和 RNA 抽提，建議在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 進行非酶反應(yīng)的細胞收獲。因為 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，進行RNA 分析時，應(yīng)設(shè)一個 Corning Matrigel matrix（不接種細胞）的對照組。

其它從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞的方法：

• 降低溫度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的時間并且僅適合一部分應(yīng)用。

• 離心以破壞 Corning Matrigel matrix 結(jié)構(gòu)。

1. Corning? Matrigel? matrix包被過的培養(yǎng)皿可以儲存多長時間呢？

包被過的培養(yǎng)皿最好當天使用，具體情況取決于實驗?zāi)康?。需要保存的情況下，可在37°C培養(yǎng)箱中最多存放7天。保存時Matrigel表面需要使用無血清培養(yǎng)基均勻覆蓋，保持濕潤。

2.  如何確定Corning? Matrigel? matrix的包被用量？

*其他常用培養(yǎng)器皿的有效培養(yǎng)面積可查看www.corning.com/lifescience

3. 哪些情況下應(yīng)該選用薄膠？什么時候用厚膠呢？ 3D培養(yǎng)有哪些應(yīng)用？

薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖。如原代細胞培養(yǎng)，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠；厚膠主要用于3D細胞培養(yǎng)，如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結(jié)構(gòu)（Ring Assay），以及進行細胞侵襲實驗等；3D細胞培養(yǎng)實驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復(fù)雜結(jié)構(gòu)，如生物組織等。

詳細信息請參閱Corning? Matrigel? matrix使用指導(dǎo)手冊。

4. 進行內(nèi)皮管形成實驗，應(yīng)該選用多大濃度的Matrigel呢？

進行該實驗，Matrigel最低濃度應(yīng)不低于10mg/mL。

5. 所有的Corning? Matrigel? matrix 都可以用于人胚胎干細胞（hESC） 培養(yǎng)嗎?

不是的。Corning提供專門用于人胚胎干細胞（hESC）培養(yǎng)的Corning? Matrigel? matrix（貨號為 354277）。該產(chǎn)品生產(chǎn)過程中經(jīng)過嚴格的質(zhì)量監(jiān)控，可以保證hESC培養(yǎng)的一致性、可重復(fù)性和高度可靠性。在干細胞培養(yǎng)領(lǐng)域知名的STEMCELL Technologies公司，也正是選用此產(chǎn)品包被的培養(yǎng)板，用于生產(chǎn)其mTeSR?1產(chǎn)品。hESC在mTeSR1培養(yǎng)體系中可以維持未分化狀態(tài)，保持標準形態(tài)并正常表達表面標志物。

此外，Corning BioCoat? Matrigel matrix提供預(yù)包被產(chǎn)品，如預(yù)包被的6孔板（貨號354671）。該系列產(chǎn)品不同批次間的Matrigel包被濃度一致，方便用戶使用；用于hESC培養(yǎng)，可以維持干細胞應(yīng)有的自我更新能力和多能性。如果使用非專門用于hESC培養(yǎng)的Corning? Matrigel? matrix培養(yǎng)hESC，細胞培養(yǎng)效果可能不理想，不推薦用戶使用。

6. 做細胞侵襲實驗，需要使用多少Corning? Matrigel? matrix進行包被？

包被24孔通透性支持物，推薦每孔使用0.1 mL (濃度200-300 μg/mL) ，Corning?Matrigel? matrix貨號為354234, 354230 。

7. Corning? Matrigel? matrix的最低成膠濃度是多少？

不同的實驗?zāi)康男枰煌腗atrigel濃度，用戶應(yīng)該根據(jù)具體的實驗需求確定。Corning?Matrigel? matrix最低成膠濃度為 3 mg/mL。稀釋時不要簡單進行體積倍比稀釋，不同批次間的Matrigel濃度有差異，應(yīng)該根據(jù)最終工作濃度 (mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血清培養(yǎng)基）的量。用于體內(nèi)研究的Matrigel，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應(yīng)低于 4 mg/mL。

8. Corning? Matrigel? matrix膠塊在體內(nèi)可以維持多長時間？

基質(zhì)膠膠塊可以在體內(nèi)維持至少一周的時間。

9. 怎樣稀釋Corning? Matrigel? matrix?

使用冰上預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基或者PH 7.4的PBS。

10. 應(yīng)該如何對Corning? Matrigel? matrix移液操作?

推薦使用預(yù)冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預(yù)冷。吸液時不要觸及瓶子底部；分液時切忌過快、用力過猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時，應(yīng)該吸取6mL，分液到移液管內(nèi)仍有1mL時即停止；如果使用自動移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進行分液。

11. 為什么我的Corning? Matrigel? matrix很粘稠？

基質(zhì)膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0 mg/mL，基質(zhì)膠會顯得非常厚重。Corning? Matrigel? matrix基質(zhì)膠產(chǎn)品在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度Corning? Matrigel? matrix(Corning? Matrigel? matrix HC)不稀釋也可以直接使用，如用于培養(yǎng)腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內(nèi)后，細胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標準濃度的Corning? Matrigel?matrix產(chǎn)品使用方法使用，具體稀釋濃度根據(jù)實驗需求確定。

除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個運輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏Corning? Matrigel? matrix的冰箱帶有自動除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質(zhì)膠成膠。所以，切忌將Corning?Matrigel? matrix儲藏于此類冰箱中。為保證Corning? Matrigel? matrix的使用效果，凍融次數(shù)應(yīng)該盡可能減少。拿到新的Corning? Matrigel? matrix后，請按照單次用量進行分裝。每次融化操作，Matrigel基質(zhì)膠都應(yīng)該放置于冰上。如果Matrigel基質(zhì)膠在成膠狀態(tài)被凍住，再次融化時將不能成恢復(fù)液體。

12. Corning? Matrigel? matrix可以誘導(dǎo)ES/iPS細胞分化嗎？

可以的，已經(jīng)有相關(guān)文章表明 Corning? Matrigel? matrix可以用于ES/iPS細胞的分化研究。

13. 為什么Corning? Matrigel? matrix在37°C成膠，而在4°C時卻呈液體狀態(tài)？

Corning? Matrigel? matrix是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜， 新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原, 巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構(gòu)成了Matrigel的基本結(jié)構(gòu)。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價鍵可以結(jié)合，促使Matrigel形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價鍵結(jié)合，所以Matrigel呈現(xiàn)液體狀態(tài)。

Matrigel matrix丨康寧基質(zhì)膠使用指南-2